ColoraçÃo de Gram: samm-sammult ja milleks see on mõeldud

Gram plekk ehk lihts alt Gram on kiire ja lihtne tehnika, mille eesmärk on eristada baktereid nende rakuseina omaduste järgi pärast kokkupuudet erinevate värvainete ja lahustega.

Seega on Gram-värvimise abil võimalik kontrollida lisaks bakterite kujule ka nende omandatavat värvi, mis on oluline tulemus bakteriliikide tuvastamise muude strateegiate määratlemisel ja arsti jaoks osutada ennetavale ravile vastav alt mikroskoopiliselt täheldatud omadustele.

Gram-värvimist tehakse tavaliselt laboris rutiinselt ja see on osa bakterioskoopiauuringust. Saate aru, mis on bakterioskoopia ja kuidas seda tehakse.

Kuidas Grami värvimine toimub

Gram peits on kiire, praktiline ja odav meetod infektsioonide eest vastutavate bakterite tuvastamiseks, mis on kasulik arstidele, et osutada võimaliku infektsiooni ennetavale ravile, kuna bakterite puhul on teada nende rühmade spetsiifilised omadused.

Gramivärvimine viiakse läbi 7 põhietapiga, kuid protokoll võib laborites erineda:

1. Asetage slaidile mõned bakterikolooniad, lisades tilk vett, et hõlbustada kolooniate homogeniseerimist;
2. Lase sellel veidi kuivada, tera võib kuivamise soodustamiseks kiiresti leegi läbi minna, kuid oluline on pöörata tähelepanu temperatuurile, kuna liiga kõrge temperatuuri korral on võimalik, et bakterite struktuur, mis võib mõjutada uuringu tulemust;
3. Kui alusklaas on kuiv, katke kristallvioletse värvainega ja laske sellel umbes 1 minut mõjuda;
4. Peske alusklaasi voolava vee vooluga ja katke alusklaas lugooliga, mille eesmärk on sinine värvaine fikseerimine, ja laske sellel 1 minut toimida. Mõlemat tüüpi bakterid võivad absorbeerida värvi ja lugooli moodustatud kompleksi, muutudes siniseks;
5. Seejärel peske tera jooksva veega ja kandke peale 95% alkoholi, laske sellel 30 sekundit mõjuda. Alkohol vastutab gramnegatiivseid baktereid moodustava lipiidmembraani lahustamise eest ja seega värvaine ja lugooli vahel moodustunud kompleksi eemaldamise eest, mis muudab nende bakterite värvituks. Grampositiivsete bakterite puhul aga dehüdreerib alkohol grampositiivsete bakterite rakuseina, põhjustades pooride kokkutõmbumist ja muutes need läbimatuks;
6. Seejärel peske uuesti voolava vee all ja katke alusklaas teise värvainega, fuksiini või safraniiniga ning laske 30 sekundit mõjuda;
7. Seejärel peske slaidi jooksva veega ja laske sellel toatemperatuuril kuivada.

Kui objektiklaas on kuivanud, on võimalik asetada tilk immersiooniõli ja jälgida objektiklaasi mikroskoobi all 100-kordse objektiiviga, mis võimaldab kontrollida bakterite olemasolu või puudumist, samuti pärmid ja epiteelirakud.

Mille eest?

Gram-värvimise põhieesmärk on eristada baktereid rakuseina omaduste ja üldise morfoloogia järgi. Seega võib mikroskoobi all vaadeldavate tunnuste järgi bakterid liigitada:

• Gram-positiivsed bakterid, mis on visualiseeritud sinise värviga, kuna alkohol ei muuda nende värvi, kuna neil on paksem rakusein ja nende poorid tõmbuvad kokku lugoliga kokku puutudes üles;
• Gramnegatiivsed bakterid, mis on alkoholiga pleegitatud ja safraniini või fuksiiniga värvitud roosa/lillana.

Pärast bakterite vaatamist mikroskoobi all on võimalik, et bakteriliikide tuvastamiseks tehakse muid laboratoorseid analüüse. Grami abil ja seostades inimese poolt esilekutsutud nähtude ja sümptomitega, saab arst aga määrata ennetava ravi kuni täpsemate uuringute tulemuste saamiseni, sest nii on võimalik vähendada bakterite replikatsioonikiirust ja vältida tüsistusi..